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    網站首頁技術支持 ◇ C18色譜柱的兩種pH環境選擇方法
    C18色譜柱的兩種pH環境選擇方法
  • 發布日期:2022-02-14      信息來源:本站      瀏覽次數:85
    •     C18色譜柱具備的孔徑,改進的選擇性、吞吐量、靈敏度及鍵合能力非常適合生物分子的分離分析。適合用于親水性更強的蛋白質分離。

       
        C18色譜柱的pH環境選擇:
        對于傳統pH值使用范圍通常為2~7,因為pH值高于8時C18固定相會受到限制。由于殘余硅羥基的存在,易對堿性化合物造成不可逆吸附,造成峰拖尾,影響分離與分析。pH值太低則會使鍵合的烷基脫落,而且對成分的分離達不到要求。
        1、堿性條件下C18的選擇
        制造快速分離堿性化合物的化學鍵合相一直是研究熱點。
       
        雙齒鍵合固定相的每個硅烷化分子中含有兩個硅原子,兩個硅原子之間以-O-或-CH2-CH2等基團連接,每個硅原子含有1個C18官能團。它的環狀結構無論在低pH值條件下,還是高pH值條件下均顯示了較高的穩定性和滿意的柱效。
       
        與傳統的單齒化學鍵合相相比,這種化學鍵合固定相突出的優點是在低、中、高pH值時都有很好的穩定性。
       
        在開發普魯卡因有關物質的藥物分析方法中,對比8種色譜柱,選擇了耐受pH值范圍較大的色譜柱。分析樣品與雜質均為堿性,使用C18使各雜質與組分間分離較佳。若堿性物質間的分離效果不佳,可以考慮使用上述鍵合相填料。
       

       

        2、酸性條件下C18的選擇
        為了改善色譜柱在低pH值時的穩定性,有人提出了空間位阻方法。
       
        空間位阻作用是指連接較大基團,立體阻礙溶質基團進攻硅醇基,使硅氧烷能夠再生,提高了化學鍵合固定相抗水解的能力。
       
        還有人制備了側鏈中含有異丙基或異丁基的C18化學鍵合固定相。該固定相由于引入了較大的側鏈基團,立體阻礙了殘留硅醇基與溶質之間的相互作用,在低pH值條件下能夠保持穩定,這種化學鍵合固定相更適合酸性物質的分離。
       
        C18色譜柱就使用了空間位阻技術,其使用單官能團硅烷,具有較大的二異丁基側鏈基團,空間位阻關鍵的硅氧烷鍵合到硅膠表面,以避免在低pH值條件下水解破壞,在酸性流動相條件下提供良好的穩定性和重現性。因此,StableBond色譜柱成為低pH值方法開發的優選。在方法開發初期,若選定流動相為酸性,可將此類色譜柱作為優選。

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